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一、宗旨
进修用阳离子换取树脂柱离散氦基酸的操作形式和基础原理。
二、原理
各种氨基酸分子的机关不同，你看离子交换器。在同一PH时与离子换取树脂的亲和力有差异，离子交换。因此可依亲和力从小到大的依序被洗脱液洗脱下来，达到离散的效果。阴离子交换层析。
三、器材
1、20cmX 1cm层析管 2、试管
3、吸管． 4、恒压洗脱瓶
5、部门收集器 6、搪磁杯
7、电炉 8、分光光度计
四、试剂和资料
1、．苯乙烯磺酸钠型树脂（强酸 lx 8，阴离子交换色谱。l00一200目，我不知道离子交换柱层析。可用上海华东化工学院产品）
2 、2 mol／L盐酸溶液
3、2mol／L氢氧化钠溶液
4、圭表氨基酸溶液 天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸均配制成 2 mg／mL的0.1M盐酸溶液。
5、混合氢基酸溶液将上述天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸溶液按1：对于交换器。2．5：你看阳离子。10的比例混合。
6、柠檬酸－氢氧化钠一盐酸冲液（pH5.8），阳离子交换膜。钠离子浓度0 .45M）
取柠檬酸（C6O7H8.H20 ）14.25g、氢氧化钠9.30g和 浓盐酸 5．25 mL溶于少量水后，定容至 500 mL，阴离子。冰箱留存。
7、显色剂 2 g水合茚三酮溶于 75mL乙二醇单甲醚中．加水至 100 mL。对比一下阴离子交换层析。
8、50%乙醇水溶液
五、操作
1、层析柱的准备：离子交换器图纸。将强酸型阳离子换取树脂用氢氧化钠处理成Na good solid+型后洗至中性（处理形式见第三篇实验十二）．搅拌一小时后装成一个直径1cm．高 16～18 cm的层析柱。其实阳离子交换量 m.e.。
2、氨基酸的洗脱：离子交换。用P H5.8的柠檬酸缓冲液流洗均衡换取住（装备如图）。离子交换。医治流速为 0.5 mL／min，对于全自动钠离子交换器。流出液达床体积的4倍时即可上样。离子交换。离子交换机。由柱上端仔细加人氨基酸混合液0．25—0．5 mL，同时起头收集流出液。离子交换器。当样品液弯月面靠近树脂顶端时，即刻加入0.5 mL拧檬酸缓冲液冲洗加样品处。听说层析。待缓冲液弯月面靠近树脂顶端时。钠离子交换器。再加入0．5 mL缓冲液。想知道阳离子交换器。如此反复两次，阳离子交换膜。然后用滴管注意注入柠檬酸缓冲液（切勿搅动床面），阳离子交换膜。并将柱与洗脱瓶和部门收集器相连。起头用试管收集洗脱液，自动钠离子交换器。每管收集lmL．共收集60一80管。
3、氨基酸的判断：向各管收集液中加lmL水合茚三酮显色剂并混匀，在沸水浴中淮确加热15分钟后冷却至室温．再加15 mL的50％乙醇液。放置10分钟。以收集液第2管为空白，测定A570nm波长的光吸收值。以光吸收值为纵坐标，以柱洗脱体积为横坐标绘制洗脱曲线。以已知3种氨基酸的纯溶液为样品，按上述形式和条件分别操作，将得到的洗脱曲线与混合氨基酸的洗脱曲线对比．可判断3个峰的大致地点及各蜂为何种氨基酸。 www.ch-water.com 特别很是好，多谢，我正须要！ |
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